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介绍粪便钙卫蛋白试剂盒的操作步骤

2019-05-20 浏览次数:51

     粪便钙卫蛋白是诊断肠炎疾病严重性的一个指标,肠炎性疾病(IBD)患者的粪便钙卫蛋白浓度高,其疾病复发的风险增大。低粪便钙卫蛋白浓度与肠的同种异体移植排斥的低风险相关。该检测使用特异性单克隆抗体,确保测试只检测到钙卫蛋白。因此粪便钙卫蛋白试剂盒是比不可少的。
    粪便钙卫蛋白试剂盒的操作步骤主要分为FC测定抽提步骤和ELISA步骤:
    一、FC测定抽提步骤:
     1、将空的15ml聚丙烯试管连同接种环一起称重,将精密天平归零。
     2、冷冻粪便在室温下解冻后,用接种环挑取50~100mg粪便,准确称重。
     3、按粪便重量(mg):抽提缓冲液体积(ml)=1:49的比例加入抽提缓冲液,盖上试管。
     4、在涡旋振荡器上涡旋5分钟,直至混匀。
     5、将混匀的液体移入2ml离心管,高速离心5分钟。
     6、将上清液移入标记好的试管中。
    二、ELISA步骤:检测前将试剂平衡至室温
     1、用孵育缓冲液将粪便抽提液按照1:150稀释,充分混匀。
     2、将试剂盒中96孔板清洗2遍,甩干。
     3、分别吸取100ul稀释后的样本,标准品及质控品以此类推。
     4、用封膜封板,置于水平摇床,18~28°C孵育30分钟。300转/分钟。
     5、清洗5遍.
     6、每孔均加入100ul酶标液。
     7、用封膜封板,置于水平摇床上,18~28°C孵育30±5分钟。300转/分钟。
     8、清洗5遍,甩干。
     9、每孔均加入100ulTMB底物液。
     10、用封膜封板,置于水平摇床上,避光,18~28°C,孵育15±2分钟。
     11、每孔均加入100ul终止液,用吸头除去气泡,30分钟内进行第13步。
     12、用酶标仪在450nm处读数。
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